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Salud Pública y Medicina Preventiva](https://static.wixstatic.com/media/5a1ce4_1fad41a9acb5499fb76be430e26a57e9~mv2.jpg/v1/fill/w_768,h_429,fp_0.50_0.50,q_90,enc_auto/5a1ce4_1fad41a9acb5499fb76be430e26a57e9~mv2.jpg)
Para el examen de Microbiología sobre los métodos de estudio de los microorganismos, comúnmente se evalúan:
Características de los diferentes Tipos de Microscopios
Los diferentes métodos de estudio (Directo, Diferencial, fluorescente)
Métodos de cultivo
Diagnóstico Molecular
Serología básica
Tipos de Microscopios
De campo claro (óptico)
Usan Luz, platina y condensador
Capacidad de resolución de 0.2 µm
Actúan por medio de la transluminación y por ende necesita técnicas de tinción
Usa un juego de dos lentes: objetivos y oculares
De campo oscuro
Usan un condensador especial para que la luz oblicua y dispersa llegue
Capacidad de resolución 0.02 µm
No se puede estudiar el citosol con este método
De Contraste de Fases
Usan un haz de luz paralela a través de densidades diferentes
Usan también unos anillos anulares en el condensador
La diferencia entre fases provocan un efecto 3D
De Fluorescencia
Usan fluorocromos que absorben la radiación ultravioleta y así emiten luz visible
La hay Directa: Donde el anticuerpo tiene un fluorocromo y dado que el anticuerpo se unirá al microorganismo, detectaremos al microorganismo
La hay indirecta: Donde Anticuerpos con un fluorocromo detectan anticuerpos unidos al microorganismo
Electrónicos
Usan bobinas magnéticas que lanzan un haz de electrones de tungsteno que atraviesan la muestra.
La longitud de la onda enviada es aún más corta que la luz.
Se pueden estudiar virus inclusive.
Métodos de Estudio
DIRECTO
En Fresco: La muestra se lava en solución salina (Suero fisiológico, Solución de Cloruro de Sodio) y se observa así sin más en el microscopio
KOH al 10%: Usar Hidróxido de Potasio que Clarifica las muestras, eliminando el fondo proteínico de la muestra. Perfecto para estudiar Hongos y sus hifas.
Tinta China: Se le aplican unas gotas de tinta china corriente a la muestra. Perfecto apra ver cápsulas prominentes de manera rápida y sencilla. Perfecto para saber si existen Cryptococcus neoformans en el Líquido Cefalorraquídeo
Yodo de Lugol/azul de algodón: Ayuda a colorear el fondo para resaltar el objeto de estudio.
DIFERENCIAL
Gram. El más prominente de todos. Separa a las bacterias en dos grandes grupos: negativas (Rojizas) y positivas (Violetas/azules) usando cristal violeta, yodo y Safranina.
Hematoxilina férrica: Es férrica por su método de empleo en ambientes ácidos. Típicamente se usa para buscar protozoos en heces fecales
Tricrómica de Masson: Tiñe el fondo verde, el citosol azul y el núcleo rojo. También se usa típicamente en protozoos
Azul de toluidina: Puede ser usado para identificar Pneumocystis jirovecii. Hoy se usa más para identificar lugares con Displasia.
Wright Giemsa: Se usa para tincionar frotis sanguíneos
ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTES
Ziehl-Neelsen es la más sobresaliente de todas. Usada para identificar de forma rápida y eficiente a los Bacilos ácido Alcohol resistentes (BAAR) como M. tuberculosis. Necesita calor para que funcione
Kinyoun: Hace lo mismo que la anterior pero en frío
Auramina-Rodamina: Hace a los BAAR fluorescer en ausencia de permanganato de potasio.
FLUORESCENTES
Naranja de Acrilina: hace fluorescer a los hongos y sus hifas en tonos rojizos y naranjas
Blanco de Calcoflúor: Hace fluorescer a los hongos y sus hifas en tonos verdes
Anticuerpos con fluorocromos
Auramina Rodamina
Medios de Cultivo
NO SELECTIVOS ENRIQUECIDOS
Agar sangre: Hecho a base de un medio basal y sangre de algún animal. Detecta microorganismos a,b,g hemolíticos. En especial S. Aureus
Agar Chocolate: Hecho a base de un Agar Sangre calentado. Diseñado para detectar bacterias de los géneros Haemophilus y Neisseria
Agar dextrosa: Hecho a base de glucosa, caseína y PH neutro. Detecta levaduras
Agar Müeller-Hinton: Caseína sal y almidón para medir la efectividad de los antibióticos
Caldo tioglicolato con vitamina K para cultivar microorganismos anaerobios.
SELECTIVOS DIFERENCIALES
Agar MacConkey: Hecho a base de lactosa y sales biliares. Altamente selectivo para bacterias gram negativas en especial para aquellas que fermentan lactosa como las enterobacterias ( E.coli, Klebsiella)
Agar Sal y Manitol: Hecho a base de sal. Altamente selectivo para bacterias gram positivas en especial para Staphylococcus aureus porque fermenta el manitol y vuelve el cultivo amarillo
Agar Xilosa (XLD): Altamente selectivo para Salmonella (cultivo negro) y Shigella (cultivo rosa)
Agar Lowenstein Jensen: Altamente selectivo para Micobacterias y BAAR
CHRO magar: El medio de cultivo de elección para hongos del género Cándida
ESPECIALIZADOS
Agar De Carbón (BCYE): Detecta Legionella
Agar de Cistina telurito: Detecta Difteria y corynebacterium
Agar Sorbitol: Detecta E. Coli 0157
Agar Regan Lowe: Detecta Bordetella
Agar biliar: Detecta Vibrio Cholerae
Agar Taylor: Detecta Neisseria
Caldo de Lim: Detecta S. agalactiae
Diagnóstico Molecular
PCR: La reacción en cadena de la polimerasa es una técnica que obtiene un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo de muestra. Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN y tras ello resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad.
PCR en tiempo real: Es una variante de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizada para amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación RNA o ADN detectando la intensidad de la fluorescencia segundo a segundo
RT-PCR : La reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa es una variante de la PCR donde se retrotranscribe una hebra de ARN en ADN complementario usando una enzima llamada transcriptasa inversa y el resultado se amplifica mediante una PCR tradicional. Sirve para estudiar el genoma de los virus.
Serología Básica
ELISA: (ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas) es una técnica de laboratorio que identifica pequeñas partículas –antígenos–, y gérmenes que causan enfermedades. Cuando el ELISA es positivo quiere decir que se han detectado antígenos en la muestra recogida, y por tanto hay gérmenes presentes. Cuando es negativa, no se han podido detectar antígenos y se considera que la muestra no está contaminada. Muy Útil en SIDA
Western blot: Sirve para identificar proteínas específicas en una mezcla compleja de proteínas, por electroforesis en tres pasos: separación por tamaño, transferencia a un soporte sólido y, finalmente, visualización mediante la marcación de proteínas con el uso de anticuerpos en un papel de nitrocelulosa. Útil para confirmar SIDA
RIA: (Radioinmunoensayo)Se mezcla una cantidad constante de antígeno marcado radioactivamente y una cantidad constante de un anticuerpo para ese antígeno y Se produce la reacción entre antígeno (Ag) y anticuerpo (Ac)
Inmunofluorescencia: Método en el que utilizan moléculas fluorescentes para marcar un anticuerpo específico que reaccionará al contacto con el antígeno.
Aglutinación en Látex: La muestra se mezcla con gotas de látex cubiertas con un anticuerpo o un antígeno específico. Si la sustancia sospechosa está presente, las gotas de látex se agruparán (se aglutinarán).
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